Príprava vzorky:
Zhromažďovanie vzoriek: Zhromaždite vzorky, ako je krv, tkanivo, sliny a moč podľa účelu experimentu.
Extrakcia DNA: Na extrahovanie DNA zo vzorky použite vyhradenú extrakčnú súpravu DNA.
Príprava reakcie PCR:
Dizajnové priméry: Návrh špecifické páry primérov na základe cieľovej sekvencie na amplifikáciu templátovej DNA.
Pripravte reakčnú zmes: vrátane templátovej DNA, primérov, pufra, DNA polymerázy, DNTP (deoxynukleozid trifosfáty), mg 2+ atď.
Nastaviť program PCR:
Nastavenia prístrojov PCR: Zadajte predvolené parametre cyklu PCR, ako je napríklad teplota predhrievania 95 stupňov, teplota denaturácie (ako je 95 stupňov), teplota žíhania (napríklad 55 stupňov), teplota predĺženia (napríklad 72 stupňov) a počet cyklov.
Reakcia PCR:
Pridajte vzorku: Pridajte reakčnú zmes do reakčnej nádrže alebo čipu PCR a každá vzorka má zvyčajne jednu reakciu.
Vykonajte PCR: Prístrojové cykly PCR podľa predvoleného programu, vrátane vykurovania, chladenia, žíhania a predĺženia.
Analýza produktu:
Chladenie po amplifikácii: Po dokončení PCR sa vzorka stručne ochladí na 4 stupňa.
Elektroforetická separácia: Na oddelenie produktov PCR s rôznymi dĺžkami použite technológiu gélovej elektroforézy, ako je elektroforéza agarózového gélu.
Fluorescenčné skenovanie: Fluorescenčne označené priméry emitujú svetlo špecifickej vlnovej dĺžky v amplifikovanom produkte a prístroj PCR tieto signály číta a zaznamenáva ich.
Spracovanie a interpretácia údajov:
Softvér na analýzu údajov: Na analýzu fluorescenčného signálu a výpočet koncentrácie alebo relatívnej koncentrácie cieľového fragmentu použite špecializovaný softvér.
Interpretácia výsledkov: Na základe krivky a základnej línie PCR určte, či je PCR úspešný, či cieľový fragment existuje a koľko to je.
Výsledok zaznamenávanie a zachovanie:
Zaznamenajte výsledky v experimentálnej správe a správne chrániť pôvodné údaje a vzorky.